Cervical cytology, HPV DNA and mRNA - a comparative study in 162 patients / Citologia cervicovaginal, DNA HPV e RNAm - estudo comparativo em 162 pacientes

In contrast to the general improvement of the socioeconomic status of the Brazilian population, pathologies that are characteristic of poor health assistance persist. Among those, cervical cancer (CC) is emblematic; it still presents a persistently high incidence. Objective: to compare the performance of cervical cytology to HPV DNA and mRNA detection methods in 162 patients undergoing routine gynecological clinical practice. Methods:a total of 162 patients attended during routine gynecological examination in a private clinic in Florianópolis, Santa Catarina, Brazil, had cervical samplescollected and processed for cytopathological and molecular tests, conventional PCR and NASBA. Positive samples positive for HPV DNA were submittedto Type-Specific PCR (TS-HPV PCR). Patients with altered smears were submitted to colposcopy and biopsy. Results: among the 162 samples, 19.8%(32/162) had altered smears, being 4/32 classified as ASC-H, 9/32 as ASC-US, 9/32 as LSIL and 10/32 as HSIL. Biopsies revealed nine cases of CIN I,nine CIN II and one CIN III, while seven were negative for cervical neoplasia. Overall, HPV DNA was detected in 38.3% (62/162) of the samples and HPV E6/E7 mRNA expression was found in 13.6% (22/162). Using TS-HPV PCR, HPV 16 was the most frequent type, found in 8% of the samples (5/62).Considering CIN2+ the gold-standard, cytology had 38.5% of specificity. Sensitivity and specificity of HPV-DNA PCR and NASBA were, respectively,100% and 60%; 18.7% and 68.7%. Conclusion: mRNA E6/E7 expression was not a highly specific or sensitive marker for prevalent cervical disease while HPV DNA may be used for cervical cancer screening only in conjunction to more specific adjuvant tests.

Em contraste com a melhora geral da situação socioeconômica da população brasileira, patologias que são características de uma deficiente assistência à saúde persistem. Entre elas, o câncer cervical (CC) é emblemático, ainda apresentando uma persistente alta incidência. Objetivo: avaliaro desempenho da citologia e de métodos de detecção de DNA e RNAm de HPV em 162 pacientes submetidas a prática clínica ginecológica de rotina.Métodos: cento e sessenta e duas pacientes atendidas em uma clínica particular de Florianópolis, Santa Catarina, Brasil, tiveram amostras cervicais coletadas e processadas para estudo citopatológico e molecular; PCR convencional e NASBA. Amostras positivas para o DNA do HPV foram submetidas àPCR tipo-específica (PCR HPV-TE). Resultados: entre as 162 amostras, 19,8% (32/162) apresentaram esfregaços alterados, sendo 4/32 classificadas comoASC-H, 9/32 como ASC-US, 9/32 como LSIL e 10/32 como HSIL. Biópsias revelaram nove casos de NIC I, nove casos de NIC II e um caso de NIC III. ODNA do HPV foi detectado em 38,3% (62/162) das amostras. Expressão de E6/E7 (RNAm) foi encontrada em 13,6% (22/162) das amostras. Utilizando a PCR tipo-específica (HPV-TE), o HPV 16 foi o tipo mais frequente, encontrado em 8% (5/62) das amostras HPV+. Considerando NIC 2+ o padrão-ouro,a especificidade da citologia foi de apenas 38,5%, enquanto a sensibilidade e a especificidade da PCR DNA e RNAm foram, respectivamente, 100% e 60%;18,7% e 68,7%. Conclusão: a expressão de E6/E7 RNAm não se mostrou um marcador altamente específico ou sensível para doença cervical prevalente,enquanto o DNA HPV pode ser utilizado para rastreamento apenas em conjunto com testes adjuvantes mais específicos.

Prevenção do câncer cervical: associação da citologia oncótica a novas técnicas de biologia molecular na detecção do papilomavírus humano (HPV) / Cervical cancer prevention: association of new techniques of molecular biology with the oncotic cytology in detection of human papillomavirus (HPV)

O câncer do colo uterino é conhecido como uma das causas mais frequentes de óbito na população feminina em todo o mundo. A infecção persistente por papilomavírus humano (HPV) é o principal fator de risco para o câncer cervical e suas lesões precursoras. Objetivo: avaliar os métodos diagnósticos do câncer cervical: citologia oncótica, DNA do HPV pela PCR, detecção do RNAm das proteínas E6 e E7 dos HPVs de alto risco, para acrescentar novos marcadores na detecção do HPV em amostras com citologia alterada. Métodos: foram avaliados os resultados da citologia oncótica de3.000 pacientes, atendidas no Laboratório Vital, Nonoai - RS, de março de 2009 a janeiro de 2010, classificando-as conforme a faixa etária e codificação de Bethesda, 2001. Foram selecionados dois grupos: o grupo A incluiu pacientes com citologia prévia alterada e o grupo B, pacientes com citologia sem anormalidades. Foram coletadas 47 amostras, 22 do grupo A e 25 do grupo B. Três amostras do grupo B apresentaram inibidores da PCR e foram excluídas.A análise dos dados considerou 22 amostras em cada grupo. A detecção do HPV foi feita pela reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando-se os primers consenso MY9/11 e GP5+/6+. O RNAm das proteínas E6 e E7 foi detectado pelo método Real-Time NASBA. Resultados: nas amostras do grupo A, houve detecção do DNA/HPV pela PCR em 14 (64%) amostras, e RNAm das proteínas E6 e E7 do HPV em seis (27%) amostras. Todas as 22 amostras do grupoB foram negativas nos métodos moleculares. Conclusão: neste estudo, a citologia prévia alterada associada a testes moleculares indica a necessidade de monitoramento ou intervenção terapêutica das pacientes. Assim, conclui-se que a citologia oncótica associada à detecção do DNA do HPV pela PCR e à expressão das oncoproteínas E6 e E7 é a alternativa para identificar precocemente pacientes com elevado risco de desenvolver o câncer cervical.

Worldwilde, the cervical cancer is known as one of the most frequent cause of death in female population. Persistent infection with oncogenic human papillomavirus (HPV) is the main risk factor for cervical cancer and its precursor lesions. Objective: to evaluate the diagnostic methods of cervical cancer: oncotic cytology, HPV DNA by PCR, detection of mRNA E6 / E7 proteins of high-risk HPV, to add new markers in the detection of HPV.Methods: were evaluated 3,000 results of oncotic cytology from patients referred to Vital Laboratory, Nonoai- RS, Brazil, from March 2009 to January2010. The results were grouped according age and Bethesda classification, 2001. Group A included patients with previous altered cytology and GroupB patients without abnormalities in cytology. To molecular tests were collected 47 samples, 22 from group A and 25 from group B. Three samples from group B presented PCR inhibitors and were excluded. The detection of HPV was made by polymerase chain reaction (PCR) using the consensus primers MY9/11 and GP5 +/6 +. The mRNA E6 / E7 proteins were detected by real-time NASBA. Results: in samples of group A, DNA/HPV was detected in 14(64%) samples, and mRNA E6 / E7 proteins of HPV was detected in 6 (27%) samples. All 22 samples of group B were negative to molecular methods.Conclusion: in this study, the previous altered cytology associated with molecular methods indicates the need for monitoring or therapeutic intervention of patients. The oncotic cytology associated with the detection of HPV DNA by PCR and the expression of oncoproteins E6 / E7 are alternatives to identify early lesions in patients with high risk of developing cervical cancer.

Cistatina C: um novo marcador para a filtração glomerular comparada ao clearance de creatinina e a creatinina sérica / Cystatin C: a new marker for glomerular filtration rate compared to creatinine clearance and serum creatinine

A Cistatina C é uma proteína de baixo peso molecular (- 13 kDa) produzida constantemente em todas as células nucleadas. Esta molécula é livremente filtrada no glomérulo renal, reabsorvida e catabolizada no túbulo proximal, sendo os níveis séricos dependentes e indicadores da função de filtração glomerular. Esta revisão aborda o desempenho da Cistatina C em relação aos testes usualmente empregados na rotina laboratorial para avaliação da função renal. Verifica-se que a Cistatina C é um marcador confiável da filtração glomerular mais sensível e específico que as determinações de creatinina sérica e clearance de creatinina, e pode ser uma alternativa atrativa, especialmente quando a população pediátrica é considerada.